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现在是时候与您的血细胞计数器分手了吗?

时间:2021-01-05 09:37 点击次数:
 
细胞培养几乎总是包括对细胞进行计数的步骤。无论目标是确定传代的合适接种量,下游实验的收获细胞还是监测细胞健康,细胞计数的准确性和效率至关重要。尽管血细胞计数法已用于计数细胞数十年,但人们越来越认识到它的局限性,导致许多研究人员考虑使用替代方法。借助基于现代Coulter计数器的系统,比以往任何时候都可以更快,更轻松,更一致地进行细胞计数-都在方便的手持式设备中-您和您的血细胞计数器告别了吗?菌落计数器产品
众所周知,基于血细胞计数仪的细胞计数不准确
 
虽然血细胞计数法是最常见的细胞计数方法,可广泛使用且价格相对便宜,但它既费时又容易出错。简而言之,在典型的基于血细胞计数器的细胞计数过程中,将载玻片放在计数室上方;用移液管将10 µL稀释的细胞样品(通常用染色剂,如锥虫蓝处理)加到血细胞计数器中。使用显微镜手动计数细胞;然后进行计算以获得以细胞/ mL为单位的细胞浓度。
 
这些步骤中的每一个都可能是错误的主要来源。载玻片放置不充分和移液技术不佳都会导致将不正确的体积装入血细胞计数器,而手动计数细胞又是不准确的另一个原因-在是否计数接触计数边缘的细胞时经常会产生混淆室场,或是否应该将细胞分类为活的还是死的。后一种问题由于许多染色试剂使用不当而具有细胞毒性这一事实使问题更加复杂。在计算阶段,错误也很常见,用户经常无法计算稀释系数,忘记将其除以所使用的计数室字段数,或者乘以除10的四次方之外的其他值确定最终细胞浓度。
 
错误的细胞计数可能是灾难性的
 
根据对单元进行计数的原理,将事情弄错的下游影响可能会有很大不同。在传代过程中高估了细胞数量的情况下,新接种的细胞群体可能稀疏而无法存活。相反,繁殖过程中细胞数量的低估会导致细胞过度拥挤,从而导致细胞发生表型变化。使用太少的细胞进行蛋白质提取,免疫检测或功能测定可能意味着目标靶标无法检测或结果偏斜。当认为数据不可靠并且必须重复实验时,对细胞健康状况的不正确评估可能会浪费时间和资源。由于这些原因,许多研究人员更喜欢库尔特计数技术,而不是基于血细胞计数器的细胞计数方法。

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